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蛋白酶k的作用及使用方法
2025-09-24
蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛。包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性。蛋白酶K的主要作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)，提高雜交信號(hào).但蛋白酶K的濃度過高、消化時(shí)間過長(zhǎng)或孵育溫度過高時(shí)，都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)...
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動(dòng)物基因組DNA提取方法及步驟介紹
2025-09-24
基因組DNA提取是最常見分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)之一。今天給大家介紹的是動(dòng)物基因組DNA提取。DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象，為了進(jìn)行測(cè)序、雜交、基因表達(dá)、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中最重要、最基本的操作之一。動(dòng)物基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)步驟：1、取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見組織...
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胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
2025-09-22
應(yīng)用：胸腺嘧啶核苷為生化試劑，制備生物培養(yǎng)基，例如HAT選擇性培養(yǎng)基的制備。原理：在單抗制備中，由于需要進(jìn)行選擇性殺死非目標(biāo)細(xì)胞，所以使用添加HAT的選擇性培養(yǎng)基，其依據(jù)是細(xì)胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（“D途徑”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中，葉酸作為重要的輔酶參與這一過程，而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物，可以阻斷DNA合成的“D途徑”。另一條途徑是應(yīng)急途徑或補(bǔ)救途徑（“S途徑”），它...
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簡(jiǎn)述TBST緩沖液的配制及應(yīng)用
2025-09-22
TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，Tween20這三種物質(zhì)，是做WESTERNBLOT中常用的一種緩沖液。TBST緩沖液的配制1000ml×TBST的配置先稱量NaCl40g，倒入燒杯中，加DDW蒸餾水400ml,再稱量NaCl47.6g，倒入剛才的那個(gè)燒杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次稱量不方便，所以分兩次稱量，且易于溶解）。往燒杯中加入Tris—HCl緩沖液100ml，最后加（吐溫20）5ml,轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，在定容，轉(zhuǎn)移即可。TBST緩沖液的應(yīng)用...
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DMEM培養(yǎng)基中DMEM粉劑配制方法步驟
2025-09-22
DMEM是現(xiàn)今細(xì)胞培養(yǎng)中比較常見的培養(yǎng)基之一，dmem培養(yǎng)基是建立在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研究出來(lái)的，它與MEM培養(yǎng)基相比較，DMEM培養(yǎng)基中加大了MEM培養(yǎng)基中各種成分的用量，下文主要介紹一下自己配制DMEM的方法。1制備新鮮三蒸水或Millipore超純水。2稱取所需量的干粉培養(yǎng)基，加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個(gè)包裝的培養(yǎng)液，在將整個(gè)包裝的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包裝袋內(nèi)面2次，倒入培養(yǎng)液中，以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。磁力攪拌或人工攪拌使之充分溶解。3根據(jù)包裝...
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簡(jiǎn)述tbst與pbst的區(qū)別及配置
2025-09-22
TBST是TBS+Tween的縮寫，生物實(shí)驗(yàn)中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst與pbst都有上面區(qū)別呢？tbst與pbst的區(qū)別：1、TBST的pH值隨溫度變化大一點(diǎn)，而PBST似乎容易有沉淀，若稀釋抗體后需要反復(fù)使用的話建議使用TBST溶解。2、兩種洗液用起來(lái)沒有什么區(qū)別，都是提供一個(gè)緩沖的PH值環(huán)境，加上吐溫20有助于蛋白的洗脫。PBST的磷酸鹽緩沖液加Tween-20，而TBST是Tris緩沖液加Tween-20。PBS溶液是指磷酸緩沖液(...
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剛果紅培養(yǎng)基的配方及原理
2025-09-22
纖維素剛果紅培養(yǎng)基用于纖維素分解菌的分離和鑒別，纖維素分解菌周圍有紅色分解圈。剛果紅培養(yǎng)基的配方：硝酸鈉1.0磷酸氫二鈉1.2磷酸二氫鉀0.9硫酸鎂0.5氯化-鉀0.5酵母浸出粉0.5酸水解酪蛋白0.5剛果紅0.2纖維素粉5.0瓊脂15.0pH值7.0±0.125℃剛果紅培養(yǎng)基的用法：稱取本品25.3g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。纖維素剛果紅培養(yǎng)基篩選菌種的原理:1、剛果紅可以跟大分子多糖牢固結(jié)合。2、纖維素是大分子多...
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活性氧檢測(cè)試檢測(cè)的工作流程步驟
2025-09-10
活性氧檢測(cè)試檢測(cè)的工作流程步驟活性氧檢測(cè)試檢測(cè)流程：從探針加載到信號(hào)輸出探針加載（細(xì)胞預(yù)處理）步驟：將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板（如96孔板），待貼壁后更換無(wú)血清培養(yǎng)基（避免血清干擾）。加入終濃度為5-20μM的探針（如DCFH-DA），37℃孵育20-30分鐘。關(guān)鍵點(diǎn)：探針濃度需優(yōu)化：過高導(dǎo)致背景噪聲，過低降低靈敏度。避光操作：熒光探針易被光淬滅，需用錫箔紙包裹培養(yǎng)板。ROS誘導(dǎo)（刺激處理）目的：人為提高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，模擬病理或應(yīng)激狀態(tài)。常用刺激物：氧化劑：H?O?（100-50...
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