如何降低ELISA試劑盒實驗誤差?

更新時間：2022-01-12

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　　ELISA試劑盒實驗誤差概率如何降低?在實驗操作的過程中，我們除了需要多點細(xì)心之外，還有一些需要重點注意的地方：

　　1：檢驗技師

　　應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。

　　2：校對

　　使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。

　　3：仔細(xì)閱讀說明書

　　嚴(yán)格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復(fù)試驗確定成立后才能改進。

　　4：洗滌

　　洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。

　　5：反應(yīng)時間

　　反應(yīng)時間過長，酶失活;反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。

　　6：保存期

　　注意ELISA試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。

　　7：試劑的實用性

　　試劑的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。

　　8：掌握顯色時間

　　顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。

　　9：加樣

　　如果加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，ELISA試劑盒直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

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