支原體（mycoplasma）：又稱霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的小的簡單的原核生物?；驍?shù)量為480。支原體細胞中*可見的細胞器是核糖體。

培養(yǎng)支原體的營養(yǎng)物質要求比一般細菌高，除基礎營養(yǎng)物質外還需加入10～20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。適pH7.8～8.0之間，低于7.0則死亡，但解脲支原體是個例外，它的適pH在6.0～6.5之間。

支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、培養(yǎng)基的污染、操作者本身的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。

分離培養(yǎng)法：

分離培養(yǎng)法是支原體檢測的金標方法，其檢測度高。這種方法是從可疑的細胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會在這種瓊脂平板上*生長，終形成明顯可見的特征性菌落。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結果，因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養(yǎng)法也存在兩個弊端，一是檢測時間太長，支原體要長出明顯克隆少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候。

如果你實在不想等這么久，或者希望在分離培養(yǎng)法的等待過程中先拿到初步結果，你可以試一試DNA、PCR或酶學檢測方法。不過需要注意的是，上述檢測方法都不能單獨檢出所有類型的支原體，而且靈敏度也沒有分離培養(yǎng)法高，所以好結合使用兩種方法以獲得可靠的檢測結果。

DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天時間。DNA檢測所用的指示細胞通常是細胞質區(qū)域較大的Vero細胞，如果原樣本中含有支原體，那么當細胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時，就可以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒。分離培養(yǎng)法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠，而DNA法可以準確的將其檢測出來。

PCR法：

PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株，PCR法檢測支原體只需幾個小時，是快但也是不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本，其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中，支原體DNA會顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數(shù)支原體，但謹慎起見好同時使用另一種檢測方法來進行驗證。

酶學檢測和ELISA：

此外，也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學檢測是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內支原體的酶可以將ADP轉化為ATP，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測，以ELISA法為基礎的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體，來檢測培養(yǎng)物中是否含有支原體。

北京索萊寶科技有限公司為生化試劑供應商，專業(yè)生產銷售生化試劑、生物試劑、細胞培養(yǎng)基、試劑盒、實驗耗材等產品。支原體檢測試劑盒是索萊寶自產產品，其貨號為CA1080。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭氏染色為陰性。索萊寶支原體檢測試劑盒利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區(qū)域，因為支原體的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。