線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：80mL×2 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；溶于 1mL 丙酮，可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙酮 100 倍 稀釋后使用。 試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 2mL 丙酮溶解備用。 試劑四：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存；

產(chǎn)品說(shuō)明： 線(xiàn)粒體復(fù)合體Ⅱ又稱(chēng)琥珀酸-輔酶 Q 還原酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線(xiàn) 粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時(shí)輔基 FAD 還原為 FADH2，后者進(jìn)一步還原氧化型輔 酶 Q 生成還原型輔酶 Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。 復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶 Q 可進(jìn)一步還原 2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有 特征吸收峰，通過(guò)檢測(cè) 2,6-二氯吲哚酚的少速率來(lái)計(jì)算該酶活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑： 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板、丙 酮、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、復(fù)合體Ⅱ的提?。?/p>

(1) 稱(chēng)取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞，加入 1.0 mL 提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。

(2) 4 ℃ 600 g 離心 10min。

(3) 將上清液移另一離心管中，4 ℃ 11000 g 離心 15min。

(4) 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線(xiàn)粒體泄漏的復(fù)合體Ⅱ（此步可選做，可以判斷線(xiàn)粒體提 取效果）。

(5) 在沉淀中加入 400uL 提取液，超聲波破碎（功率 20％，超聲 5 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 15 次）， 用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測(cè)定，并且用于蛋白含測(cè)定。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638

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